LABORATORIOS DE  MICROFOTONICA

 

TRANSFERENCIA DE ENERGIA ENTRE FLUOROCROMOS

La transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET), también llamada transferencia lineal de energía (en inglés, fluorescence resonance energy transfer) es una interacción que ocurre solo a muy corta distancia entre dos estados de excitación electrónica de dos moléculas fluorescentes en la que la longitud de onda de emisión de una de ellas coincide con la de excitación de la otra.

La FRET es inversamente proporcional a la sexta potencia de la distancia entre los dos fluorocromos por lo que solo puede producirse cuando están muy próximos.

En el ejemplo de la figura, la Blue fluorescent protein (donador) se excitaría con un fotón ultravioleta y emitiría en el rango del azul, mientras que la green fluorescent proteín (aceptor) se excitaría con los fotones azules emitidos por la BFP y emitiría fotones verdes. Por si solos los fotones ultravioletas serían incapaces de conseguir la emisión de fotones verdes de la GFP por lo que la emisión de estos solo podría realizarse si ha habido FRET.

La FRET es una técnica importante para investigar una gran variedad de fenómenos biológicos que implican la proximidad entre dos moléculas.

Condiciones necesarias para el FRET

1. Las moléculas de aceptor y donante deben estar muy próximas (10-100 Å).

2. El espectro de absorción del aceptador debe sobreponer el espectro de emisión de fluorescencia del donante.(ver figura).

3. Si extinguimos la fluorescencia del fluorocromo aceptador (fotobleaching)  aumenta la intensidad de la emisión del fluorocromo donador. Lo que hacemos es destruir la FRET excitando fuertemente con el laser adecuado (488 nm para GFP) con lo que el aceptador ya es incapaz de absorber fotones, al excitar al fluorocromo donador (BFP con 350 nm) la intensidad de emisión de éste último AUMENTA respecto a cuando se producía FRET porque los fotones que emite ya no son absorbidos por el aceptador.

 

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