FUNCIONES
El Servicio de Citometría de Flujo tiene como objetivo:
1.- Asesorar a los usuarios del Centro sobre los principios y las
aplicaciones de la citometría de flujo analítica, con objeto de obtener
del mismo el máximo aprovechamiento.
2. Desarrollar y optimizar nuevas aplicaciones incorporando nuevas tecnologías y nuevos reactivos
3. Realizar aislamientos celulares mediante “Sorting”.
A continuación se describen detalladamente las actividades que, el Servicio de Citometría de Flujo del CNB, lleva a cabo:
1. Mantenimiento de los equipos
-Mantenimiento y control de todos los Citómetros de Flujo del Centro
-Establecimiento de los protocolos y normas para la utilización de los equipos:
-Procedimientos de utilización de los equipos tales como: encendido, apagado y lavado.
-Gestión de las reparaciones en caso de avería.
2. Mantenimiento y control de todos los reactivos:
-Mantenimiento y control de todos los reactivos (pedidos, stock y funcionamiento) utilizados en Citometría de Flujo por el personal del Centro.
-Titulación de Anticuerpos para su posterior utilización
3. Asesoramiento a los usuarios para la utilización de los equipos de citometría analítica.
-Impartir entrenamiento y asesoramiento al personal del Centro, tanto de Citometría de Flujo, como de los diferentes Citómetros de Flujo que posee el Centro.
-Utilización de los softwares de los citómetros.
-Ajuste de las condiciones de adquisición específicas: voltajes y compensación entre Fotomultiplicadores (CitoSettings).
-Análisis y presentación de resultados
-Edición y Difusión de información técnica referente a los diferentes Citómetros de Flujo del Centro. Tipo y número de Láseres y Fotomultiplicadores, tipo de software.etc
-Edición de miniguías de cada Citómetro para facilitar el paso de muestras
4. Desarrollo de nuevas aplicaciones
- Puesta a punto de diferentes aplicaciones :
- Análisis de viabilidad con IP ó 7AAD.
- Análisis de viabilidad de células fijadas y permeabilizadas.
- Análisis de viabilidad bacteriana
- Análisis de ciclo celular mediante IP de cultivos celulares.
- Cuantificación de la subpoblación mitótica de la población G2/M con fosfohistona3
- Estudio de ploidías en plantas
- Estudios de proliferación celular mediante incorporación de Brdu tanto in Vitro como in vivo. Incorporación de Edu.
- Estudios de proliferación celular con CFSE ó CELLTRACE
- Estudios de apoptosis mediante diferentes técnicas: IP, AnexinaV, Túnel
- Eficiencia de transfección con proteínas fluorescentes.
- Eficiencia de transfección con proteínas fluorescentes en bacterias.
- Señalización Intracelular (Fosforilación).
- Estudios de potencial de membrana mediante DIOC6, JC1
- Estudio de Radicales libres mediante HE
- Estudio de formación de Iones Peróxido mediante DCHA
- Estudios de migración de diferentes tipos celulares
- Estudios de la longitud telomérica mediante la técnica de Flowfish
- Estudio de Movilización de Calcio mediante Fluo-3, mediante el ratio Fluo-3/Fura red.
- Estudio de Movilización de Calcio con proteínas fluorescentes (GFP) mediante Fura-red
- Fenotipaje de células con hasta 10 colores.
- Estudio de células T reguladoras
- Determinación de Citoquinas Intracelulares.
- Estudios de distintas poblaciones de sangre de ratón.
- Cuantificación de número de receptores.
- Estudio constante y valoración de nuevos fluorocromos para añadirlos a los ya rutinarios.
- Preparación de la información y documentación técnica de las diferentes aplicaciones. Protocolos para la preparación de las muestras según las distintas aplicaciones
5. Cuantificación de diferentes citoquinas solubles mediante ensayos de multiplexado
Procesamiento de las muestras (sueros, sobrenadantes), análisis y elaboración de resultados
6. Aislamiento celular por Cell Sorting
-Puesta a punto de todas las separaciones celulares realizadas por el Citómetro Separador: elección de fluorocromos, concentración celular, tampón, etc.
-Sorting de diferentes poblaciones celulares tanto de suspensiones celulares de cualquier órgano de ratón, como de distintas líneas celulares
-Sorting de diferentes fases de ciclo celular
-Evaluación de la pureza después de la separación